1957年Holborow等建立間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence,，IIF)檢測ANA，對ANA檢測的臨床應(yīng)用具有里程碑意義,。臨床上ANA常見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,，SLE)等系統(tǒng)性(非器官特異性)AID患者,，也可見于器官特異性AID患者，如自身免疫性肝病等,。除此之外,，ANA還可出現(xiàn)于慢性感染性疾病、腫瘤及健康人群中,。檢測ANA對AID的診斷、鑒別診斷,、分型及疾病活動性監(jiān)測等具有重要的臨床意義,。

ANA檢測的標(biāo)準(zhǔn)化對ANA的臨床應(yīng)用非常重要。2014年歐洲自身免疫標(biāo)準(zhǔn)化促進會和自身抗體標(biāo)準(zhǔn)化委員會共同發(fā)表了《抗核抗體檢測的國際建議》,。2014年8月在第12屆自身抗體和自身免疫國際研討會議上,，形成ANA熒光模型國際共識(international consensus on antinuclear antibody pattern，ICAP),，提出關(guān)于ANA熒光模型標(biāo)準(zhǔn)化分類命名的第一個國際共識,。2014年中國免疫學(xué)會臨床免疫學(xué)分會發(fā)布了《自身抗體檢測在自身免疫病中的臨床應(yīng)用專家建議》。2015年9月在ICAP第二次會議上形成了ANA檢測結(jié)果報告方式國際共識,。2016年國內(nèi)自身抗體檢測領(lǐng)域?qū)＜覍NA熒光模型國際共識和檢測結(jié)果報告方式國際共識在國內(nèi)首次進行詳細解讀,。

雖然上述國際、國內(nèi)專家建議及共識對規(guī)范ANA的檢測及明確其臨床應(yīng)用具有重要的意義,，但目前尚缺乏適合我國國情的ANA檢測的臨床應(yīng)用共識供臨床及實驗室遵循,。因此，中國醫(yī)師協(xié)會風(fēng)濕免疫科醫(yī)師分會自身抗體檢測專業(yè)委員會于2017年9月組織了國內(nèi)風(fēng)濕免疫科,、腎內(nèi)科,、健康體檢、臨床實驗室及第三方檢測實驗室等多學(xué)科專家召開本共識的啟動會,。根據(jù)啟動會提出的要求,，由8位專家根據(jù)國內(nèi)外相關(guān)文獻并結(jié)合國內(nèi)實際情況及中國的ANA檢測臨床經(jīng)驗分別獨立起草共識草案，隨后對草案進行討論匯總形成共識初稿,。共識初稿經(jīng)召開專家討論會由所有專家組成員逐條審議討論,，達成一致意見后形成本共識。本共識的制定,，旨在提高我國臨床實驗室對ANA檢測的臨床應(yīng)用范圍,、臨床意義解讀等方面的認(rèn)識水平，規(guī)范我國ANA檢測方法,、結(jié)果判斷及結(jié)果報告,，為臨床提供規(guī)范可靠的ANA檢測結(jié)果，以及ANA檢測臨床意義的正確理解和合理解釋,。

ANA作為AID重要的生物學(xué)標(biāo)志，常見于SLE,、干燥綜合征(Sj?gren′s syndrome,，SS)、系統(tǒng)性硬化癥(systemic sclerosis,，SSc),、混合性結(jié)締組織病(mixed connective tissue disease，MCTD)及多發(fā)性肌炎(polymyositis,，PM)/皮肌炎(dermatomyositis,，DM)等系統(tǒng)性(非器官特異性)AID患者。同時,，ANA可見于器官特異性AID患者,，如自身免疫性肝病、自身免疫性甲狀腺炎等,。除此之外,，ANA也可見于慢性感染性疾病、腫瘤及健康人群中,。因此,，對臨床疑似AID患者，特別是多器官受累的系統(tǒng)性(非器官特異性)AID患者檢測ANA及針對靶抗原的特異性自身抗體,。例如：原因未明的發(fā)熱,、皮膚病變(蕁麻疹、紅斑等),、關(guān)節(jié)肌肉受累(晨僵,、關(guān)節(jié)痛、關(guān)節(jié)炎,、肌肉無力,、肌肉痛等)、眼部病變(累及角膜、視網(wǎng)膜,、葡萄膜等),、肺部病變(胸腔積液、肺炎,、肺出血等),、消化系統(tǒng)病變(胃腸道出血、穿孔,、腸梗阻,、黃疸、肝脾腫大,、口腔潰瘍等),、心血管系統(tǒng)病變(心肌、心內(nèi)膜,、傳導(dǎo)系統(tǒng)等)、血液系統(tǒng)病變(溶血性貧血,、白細胞減少,、血小板減少等)、腎臟病變,、神經(jīng)病變,、精神受累、全身不適,、體重下降,、淋巴結(jié)腫大、雷諾征,、脫發(fā)等,。

健康體檢人群中ANA陽性率高達11.27%，大部分為生理性自身抗體,。但是,，ANA也可見于某些AID患者的臨床前期，如ANA及其針對靶抗原的特異性自身抗體[抗干燥綜合征抗原A (Sj?gren′s syndrome antigen A,，SSA)抗體,、抗干燥綜合征抗原B (Sj?gren′s syndrome antigen B，SSB)抗體等]可在SLE,、SS患者出現(xiàn)臨床癥狀前數(shù)年檢測到,。ANA檢測在AID患者早期預(yù)測中的應(yīng)用已成為近年來ANA臨床應(yīng)用的新進展。因此,，ANA檢測也可用于高危人群的健康體檢篩查,，如育齡期女性、AID患者的直系親屬、處于易誘發(fā)AID的環(huán)境及免疫功能異常者等,。

ANA的檢測方法包括IIF法,、ELISA等多種免疫學(xué)方法。以HEp-2細胞為實驗基質(zhì)的IIF法是進行ANA檢測的參考方法和首選方法,。雖然ELISA等其他方法也可以使用,，但需注意這些方法的敏感性和特異性存在差異。因此,，如果臨床高度懷疑ANA相關(guān)AID而其他方法檢測ANA結(jié)果陰性時,，必須采用IIF法重新檢測ANA。

采用以HEp-2細胞為實驗基質(zhì)的IIF法進行ANA檢測時,，HEp-2細胞在實驗基質(zhì)中每顯微鏡視野(放大倍數(shù)為200倍)應(yīng)可見3～5個有絲分裂細胞,；二抗應(yīng)使用熒光素標(biāo)記的抗人IgG抗體。另外,，IIF法檢測ANA的稀釋方法可根據(jù)不同的檢測試劑而采用倍比稀釋系統(tǒng)或稀釋系統(tǒng),。IIF法檢測ANA的準(zhǔn)確性與試劑、設(shè)備,、實驗人員操作和結(jié)果判讀及其他因素有關(guān),。因此臨床實驗室進行ANA檢測時應(yīng)有完善可靠的室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評體系，確保實驗檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,。如IIF-ANA的室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)包括典型熒光模型(如細胞核均質(zhì)型,、細胞核斑點型、細胞漿型等)的高,、中,、低滴度的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。陽性質(zhì)控品結(jié)果在上下1個滴度內(nèi),，陰性質(zhì)控品結(jié)果為陰性時表明該次實驗在控,。IIF法檢測ANA的自動化是今后的發(fā)展趨勢，此類自動化儀器不僅包括實驗操作的自動化(前處理),，也包括實驗結(jié)果判讀的自動化,。IIF-ANA自動化對ANA陰/陽性判讀具有較高的診斷效能，對典型的ANA熒光模型和滴度有較好的識別能力,，能提高實驗室IIF法檢測ANA的工作效率和檢測結(jié)果的一致性,。

ANA特異性自身抗體可采用多種免疫學(xué)方法檢測，不同的檢測方法具有不同的臨床應(yīng)用優(yōu)缺點。如ELISA具有高敏感性,、定量及易自動化的優(yōu)點,，但需對每個自身抗體進行逐項檢測。線性免疫印跡法(line immunoassay, LIA)具有高敏感性,、易操作,、易自動化及一次實驗操作可同時檢測多種自身抗體的優(yōu)點，但其檢測結(jié)果為半定量,，某些自身抗體的特異性偏低,。化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immunoassay, CLIA)具有高敏感性,、高特異性,、定量及自動化的優(yōu)點，但檢測成本高,、需對每個自身抗體進行逐項檢測,。

抗雙鏈DNA(double stranded DNA, ds-DNA)抗體檢測使用綠蠅短膜蟲為實驗基質(zhì)的IIF法、ELISA和放射免疫法,。IIF法和放射免疫法具有較高的臨床特異性,，若其他方法檢測抗ds-DNA抗體陽性與臨床表現(xiàn)不符合時，建議采用IIF法或放射免疫法進行進一步確認(rèn),。對SLE的疾病活動性進行監(jiān)測時，應(yīng)定期使用同種定量檢測方法進行抗ds-DNA抗體的檢測,。

ANA檢測分成ANA總抗體的檢測和針對靶抗原的特異性自身抗體檢測,。通常在ANA的臨床應(yīng)用中可先用IIF法進行ANA檢測，若結(jié)果為陽性,，需進一步進行ANA針對靶抗原的特異性自身抗體檢測,，為疾病確診提供依據(jù)。但由于不同方法存在靶抗原表位,、敏感性及特異性差異,，造成ANA總抗體的檢測和針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結(jié)果的不一致。臨床檢測中存在IIF-ANA陽性而針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結(jié)果陰性,，甚至IIF-ANA陰性而針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結(jié)果陽性的情況,。因此，當(dāng)臨床高度疑診AID時,，不論ANA總抗體的檢測結(jié)果如何,，都需要對針對靶抗原的特異性自身抗體進行檢測。

 

IIF-ANA熒光模型分類,、命名

目前,，根據(jù)ICAP提出的關(guān)于ANA熒光模型分類,、命名共識,，IIF-ANA熒光模型分為3類：細胞核熒光模型(14種)、細胞漿熒光模型(9種)和細胞有絲分裂熒光模型(5種),，所有熒光模型都被賦予一個唯一AC(anti-cell)開頭的編碼,。為確保具有重要臨床意義的熒光模型被準(zhǔn)確識別(如細胞核致密斑點型),，以及根據(jù)熒光模型判讀難易程度不同，ICAP將ANA熒光模型分為必報熒光模型和選報熒光模型,?；贏NA熒光模型的國際分類和命名原則，結(jié)合國內(nèi)ANA檢測的臨床實踐現(xiàn)狀(自身免疫性肝病在中國的發(fā)病率較高,，核膜型和細胞漿線性/肌動蛋白型作為自身免疫性肝病的重要自身抗體在臨床檢測中常見,；我國從事自身抗體檢測的專業(yè)人員能對這兩種核型有正確的識別能力)，將核膜型和細胞漿線性/肌動蛋白型這兩種易判讀且具有重要臨床意義的ANA納入必報熒光模型,。本共識建議必報熒光模型13種包括：細胞核均質(zhì)型,、細胞核斑點型(需區(qū)分細胞核致密斑點型)、著絲點型,、核點型,、核仁型、細胞漿纖維型,、細胞漿顆粒型,、細胞漿網(wǎng)狀/線粒體型,、細胞漿極型/高爾基體型、細胞漿棒環(huán)狀型,、核膜型和細胞漿線性/肌動蛋白型,，選報熒光模型15種，見圖1,。

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注：AC指抗細胞(anti-cell),，基于抗核抗體的國際分類和命名原則，結(jié)合我國目前檢測的臨床現(xiàn)狀,，建議黃色部分為必報熒光模型,，綠色部分為選報熒光模型

▲圖1 IIF-ANA熒光模型分類及命名

根據(jù)第2屆ICAP達成的共識及我國ANA檢測的臨床實踐現(xiàn)狀,，IIF-ANA檢測結(jié)果報告應(yīng)包括：檢測方法,、定性結(jié)果(陽性/陰性)、熒光模型,、滴度及必要的臨床建議。對于混合熒光模型,，熒光模型的報告優(yōu)先級順序為細胞核熒光模型,、細胞漿熒光模型、細胞有絲分裂期熒光模型,。相同優(yōu)先級的熒光模型,，建議按滴度高低順序依次報告。自身抗體檢測實驗室的ANA結(jié)果報告形式基于ANA的最新定義,，將HEp-2細胞胞漿熒光模型及細胞有絲分裂期熒光模型納入ANA陽性結(jié)果,。其報告格式范例見表1。

表1 IIF-ANA檢測結(jié)果報告范例

IIF-ANA檢測結(jié)果判讀及報告的技術(shù)主管應(yīng)有專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)(如專業(yè)學(xué)會組織的培訓(xùn),、進修學(xué)習(xí)等)及考核合格記錄(如考核認(rèn)證的合格證及崗位培訓(xùn)證等)，其他從事此項工作的技術(shù)人員應(yīng)有定期培訓(xùn)的考核記錄,，應(yīng)定期進行人員間結(jié)果判讀比對,。采用ELISA等其他檢測方法的ANA檢測結(jié)果應(yīng)包括檢測結(jié)果的定量數(shù)值和單位、參考區(qū)間及必要的臨床建議,。ANA針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結(jié)果報告應(yīng)包括檢測方法,、定性結(jié)果(若為定量檢測方法應(yīng)包含定量數(shù)值和單位)及參考區(qū)間，同時應(yīng)包括必要的臨床建議,。

ANA陽性常見于各種AID患者,，特別是系統(tǒng)性(非器官特異性)AID，也可見于器官特異性AID,、感染,、腫瘤患者及健康人群等。熒光模型是IIF法檢測ANA結(jié)果的重要檢測參數(shù),，與其針對的靶抗原在細胞內(nèi)分布相關(guān),。雖然特定熒光模型與某些ANA針對靶抗原的特異性自身抗體、AID及特定臨床表現(xiàn)存在一定的相關(guān)性,，對進行下一步針對靶抗原的特異性自身抗體的檢測具有一定的指導(dǎo)意義,，但并非完全一致，不能僅從熒光模型來推斷針對靶抗原的特異性自身抗體或AID,。

由于機體自身正常的免疫應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生生理性的自身抗體,。因此,，ANA滴度(量值)與疾病相關(guān)性無明確定論，但ANA滴度(量值)越高與AID的相關(guān)性越大,。ANA滴度(量值)與病情沒有必然聯(lián)系,，不推薦使用ANA滴度(量值)的變化來反映AID的活動性和療效反應(yīng)性。但對于某些ANA針對靶抗原的特異性自身抗體,，如抗ds-DNA抗體滴度可作為SLE疾病活動性的監(jiān)測指標(biāo)之一,，應(yīng)定期進行監(jiān)測。不同廠家試劑可采用不同的滴度(量值)系統(tǒng),，不同滴度系統(tǒng)不能直接進行滴度值的比較,，但部分檢測項目可溯源到國際單位(IU/ml)后能進行比較。ANA針對靶抗原的特異性自身抗體對AID的診斷與鑒別診斷,、病情監(jiān)測與療效觀察,、病程轉(zhuǎn)歸與預(yù)后判斷及疾病預(yù)警等方面具有重要的臨床意義，見表2,。

表2 ANA常見特異性自身抗體相關(guān)靶抗原及其主要相關(guān)AID

注：ANA為抗核抗體,，AID為自身免疫病，ds-DNA為雙鏈DNA,，DFS為致密斑點,，SSA為干燥綜合征抗原A，SSB為干燥綜合征抗原B,，snRNP為核內(nèi)小核糖核蛋白，nRNP為核糖核蛋白,，Sm為斯密斯抗原,，tRNA為轉(zhuǎn)移核糖核酸。

來源：中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2018,41(4):275-280 / 編輯：三葉